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洗脫和收集分析物(另一種情況是保留雜質(zhì)而分析物通過柱子)
在反相萃取柱上,清潔溶劑為含有農(nóng)業(yè)生產(chǎn)系統(tǒng)適當(dāng)濃度的溶劑的水或緩沖液;
為確定清洗溶劑的濃度和體積,將試樣加到 spe柱上,用5~10倍 spe柱體積的溶劑進(jìn)行清洗,對(duì)流出液進(jìn)行連續(xù)分析,得到清洗溶劑對(duì)分析物的洗脫曲線。按順序*清洗溶劑強(qiáng)度,根據(jù)分析物在不同強(qiáng)度下的洗脫曲線,確定合適的清洗溶劑強(qiáng)度和體積;
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洗脫和收集目的:將分析物全部洗脫并以小體積級(jí)分方式收集分析物,同時(shí)在 spe柱上盡可能保留比分離物保留力更強(qiáng)的雜質(zhì);
收集的分析物級(jí)分可被氮?dú)獯蹈?,然后溶解在小體積溶劑中,以提高分析物的濃度,或調(diào)整溶劑性質(zhì)以作后期分析。
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當(dāng)發(fā)現(xiàn)回收率下降時(shí),prs固相萃取柱選擇,收集該組分,prs固相萃取柱類型,并檢測(cè)目標(biāo)化合物是否在這一階段被洗脫。若經(jīng)調(diào)整 ph使可離子化的目標(biāo)化合物中性化,并通過疏水力被 spe柱吸附,則洗滌時(shí)應(yīng)注意保持 ph不變,以免因 ph變化而導(dǎo)致目標(biāo)化合物在洗滌過程中丟失。
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正壓法通常是將帶一定壓力的空氣或氮?dú)鈴?spe柱上吹走填料中的水;負(fù)壓法則是將一定真空度從萃柱下吹走殘余的水。
單獨(dú)樣品處理,可使用一個(gè)通過適配器連接到 spe柱,推動(dòng)樣品或溶劑通過 spe柱管,如需500 mg或1 g的吸附劑柱床,可選用適配器直接與配合。自動(dòng) spe作業(yè),由于其優(yōu)良的結(jié)果重復(fù)性,已被廣泛使用;96孔板的 spe裝置也是一種理想的自動(dòng)化方案。該方案適用于樣品量大,開封prs固相萃取柱,需要快速處理的場(chǎng)合。
廣州碩譜生物科技有限公司,反相spe柱,是目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)spe小柱較好的生產(chǎn)廠家。prs固相萃取柱
洗滌劑和洗脫劑的優(yōu)選
反相型和正相型洗脫液的洗脫強(qiáng)度應(yīng)分別增加和降低,但對(duì)回收率無明顯影響;
就反相模式而言,可先對(duì)目標(biāo)化合物的水溶液上樣,然后以5%、10%、20%、30%、40%、50%、70%、80%、90%、的甲1醇水溶液進(jìn)行洗脫,prs固相萃取柱分類,分別收集洗脫液分析,建立淋洗曲線,確定目標(biāo)化合物被洗脫時(shí)的溶劑體系,淋洗液中甲1醇的含量應(yīng)略低于目標(biāo)化合物正好被洗脫時(shí)的溶劑體系,而洗脫液中甲1醇的含量應(yīng)略高于目標(biāo)化合物正好被完全洗脫時(shí)的溶劑體系;當(dāng)純甲1醇無法洗脫目標(biāo)化合物時(shí),則應(yīng)測(cè)試甲1醇-甲1基叔丁基1醚混合溶液的洗脫曲線;如果離子型化合物既不溶于水也不溶于甲1醇,則可在溶劑體系中添加酸或堿。
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凈水系統(tǒng)
鍵合相位是非*性的,碰到水c18鏈就會(huì)被排斥,導(dǎo)致c18 “倒伏”,色譜峰變差,保留變?nèi)?,即水相位降,所以大多?shù)c18反相分離柱不能用純水作流動(dòng)相。一般選用c18-aq反相柱分離親水化合物,走水體系,提高保留值。
防腐鹽
單獨(dú)用酸或堿來調(diào)節(jié)流動(dòng)相中的 ph值,由于分離成分的多樣性,未必能達(dá)到實(shí)驗(yàn)所要求的效果。一般做法是:以緩沖鹽制備流動(dòng)相。但是有些緩沖鹽會(huì)析出不易觀察的微晶:過濾后,改變流動(dòng)相的組成;不過濾時(shí),晶體會(huì)損壞管柱,也容易堵塞管道,污染檢測(cè)器。所以,在滿足實(shí)驗(yàn)條件的情況下,盡量選擇不容易析出的緩沖鹽,分離結(jié)束后,一定要清洗柱子和整個(gè)分離系統(tǒng),避免出現(xiàn)色譜性霉菌。為便于制備和處理,常選用揮發(fā)性鹽類,如銨鹽等。
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