耐氟喹諾酮牛支原體探針法實(shí)時定量PCR試劑盒

探針法耐氟喹諾酮牛支原體實(shí)時定量pcr試劑盒
probe-quantitative real-time pcr kit for fluoroquinolone-resistant mycoplasma bovis
貨號：mqt-abo-20 規(guī)格：20個反應(yīng)
貨號：mqt-abo-50 規(guī)格：50個反應(yīng)
貨號：mqt-abo-100 規(guī)格：100個反應(yīng)
儲存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反復(fù)凍融。
試劑盒特點(diǎn)：
使用單核苷酸多態(tài)性pcr檢測牛支原體喹諾酮抗性，檢測單堿基突變。 使用的dna聚合酶具有抗抑制能力強(qiáng)和熱穩(wěn)定性好的特點(diǎn)；采用熱啟動方式，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。 帶有陽性對照樣品（組分c），可用于檢驗(yàn)試劑盒有效性。 帶有udg酶和dutp，可降低殘留dna的污染。 靈敏度高，檢測極限相當(dāng)于反應(yīng)液中約含5個基因組。
牛支原體（mycoplasma bovis）是最重要的致病性牛寄生支原體，呈全球流行趨勢，可引起肺炎、關(guān)節(jié)炎、乳腺炎、中耳炎、結(jié)膜炎、生殖紊亂和流產(chǎn)等多種疾病，發(fā)病率達(dá)到60%-100%。在健康或患病的牛身上均可發(fā)現(xiàn)牛支原體，其疾病表現(xiàn)和對治療和疫苗的反應(yīng)常發(fā)生變化，診斷和控制較為困難，因此其流行程度常被低估。牛支原體引起的疾病常呈慢性發(fā)展，引起動物身體虛弱，抗生素療效不明顯，因此常引起難以估測的經(jīng)濟(jì)損失。由于缺乏有效的牛支原體疫苗，抗生素是最主要的控制手段。
氟喹諾酮是一類廣譜而且高效的抗生素，常被用于治療牛支原體感染。氟喹諾酮通過抑制dna復(fù)制達(dá)到抗菌的目的，其抗性則是源于細(xì)菌的dna螺旋酶和dna拓?fù)洚悩?gòu)酶iv發(fā)生突變，導(dǎo)致藥物結(jié)合能力下降。突變點(diǎn)位于dna螺旋酶的gyra和gyrb亞基，和/或dna拓?fù)洚悩?gòu)酶iv 的parc和pare 亞基，這些區(qū)域統(tǒng)稱為喹諾酮抗性決定區(qū)域（qrdr）。體內(nèi)獲得的喹諾酮抗性突變只存在于parc基因。
對氟喹諾酮抗性的檢測，通常做法是用體外分離培養(yǎng)的菌落做敏感性測試，需要花費(fèi)很長的時間，有時需3-4周才能得到結(jié)果。pcr法檢測時間短，僅需幾個小時即可獲得結(jié)果，還具有高靈敏度和高特異性的特點(diǎn)，因此是更好的選擇。定量pcr法與普通pcr法相比，不僅可以精確定量，而且操作更為方便，更少受環(huán)境污染的影響。
本試劑盒采用雙重探針法，既可以檢測牛支原體，也可以同時檢測抗性菌株。選擇parc基因作為靶點(diǎn)，對牛支原體喹諾酮抗性菌株進(jìn)行單堿基多態(tài)性pcr鑒定。在牛支原體parc基因的265位點(diǎn)，堿基g突變?yōu)閍導(dǎo)致一個天冬氨酸突變?yōu)樘於０?，賦予支原體喹諾酮抗性。在下游間隔一個堿基的267位點(diǎn)，一些菌株帶有t突變?yōu)閏的無效突變。本試劑盒通過鑒別265位點(diǎn)的突變來檢測菌株的喹諾酮抗性。經(jīng)blast驗(yàn)證，與其他生物的基因組無交叉反應(yīng)。通過檢測23種支原體和8種常見細(xì)菌，未見假陽性結(jié)果，而150個牛支原體菌株均得到了陽性信號，可見本試劑盒具有非常好的特異性。
本試劑盒包含熱啟動dna聚合酶、dntp（以dutp代替dttp）、引物、探針、陽性對照品、rox染料，和用以防止殘余dna污染的udg（uracil-dnaglycosylase，尿嘧啶-dna-糖基酶），用戶只需準(zhǔn)備好dna樣品即可使用。
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