Taq酶-友名生物公司

競(jìng)爭(zhēng)性pcr(competitive pcr， c-pcr技術(shù)
c-pcr技術(shù)是競(jìng)爭(zhēng)cdna模板與目的cdna同時(shí)擴(kuò)增.使用同樣的引物，但一經(jīng)擴(kuò)增后。能從這些目的cdna區(qū)別開來。通常使用突變性競(jìng)爭(zhēng)cdna模板.其序列與目的cdna序列相同.不過模板中僅有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)或缺少內(nèi)切位點(diǎn)突變性的cdna模板可用適當(dāng)?shù)膬?nèi)切酶水解，并用分光計(jì)測(cè)定其濃度。cdna目的序列和競(jìng)爭(zhēng)模板相對(duì)應(yīng)的含量.可用澳化乙錠染色.電泳膠直接掃描進(jìn)行測(cè)定或摻入放1射性同位素標(biāo)記的方法測(cè)定。競(jìng)爭(zhēng)模板開始時(shí)的濃度是已知的.則cdna目的序列的*初濃度就能測(cè)定。這種方法能準(zhǔn)確測(cè)定mrna中cdna靶序列.可用于幾個(gè)到10個(gè)細(xì)胞中mrna的定量。
復(fù)合pcr(multiplex pcr)技術(shù)
在同一反應(yīng)中用多組引物同時(shí)擴(kuò)增幾種*片段.如果*的某一區(qū)段有缺失則相應(yīng)的電泳譜上這一區(qū)帶就會(huì)消失。復(fù)合pcr主要用于同一病原體的分型及同時(shí)檢測(cè)多種病原體、多個(gè)點(diǎn)突變的分子病的診斷。
重組pcr技術(shù)
重組pcr技術(shù)是在兩個(gè)pcr擴(kuò)增體系中，兩對(duì)引物分別由其中之一在其5°-端和3-端引物上帶.上一段互補(bǔ)的序列混合兩種pcr擴(kuò)增產(chǎn)物.經(jīng)變性和復(fù)性。兩組pcr產(chǎn)物互補(bǔ)序列發(fā)生粘連。其中一條重組雜合鏈能在pcr條件下發(fā)生聚合延伸反應(yīng)，產(chǎn)生一個(gè)包含兩個(gè)不同*的雜合*。
巢式pcr(nest pcr枝術(shù).
先用一對(duì)靶序列的外引物擴(kuò)增以提高模板量.然后再用一對(duì)內(nèi)引物擴(kuò)增以得到特異的pcr帶。此為巢式pcr。若用一條外引物作內(nèi)引物則稱之為半巢式pcr。為減少 巢式pcr的操作步驟可將外引物設(shè)計(jì)得比內(nèi)引物長(zhǎng)些，taq酶，且用量較少。同時(shí)在第yi次pcr時(shí)采用較高的退火溫度而第二次采用較低的退火溫度。這樣在第yi次pcr時(shí)，由于較高退火溫度下內(nèi)引物不能與模板結(jié)合，故只有外引物擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)過若干次循環(huán)。待外引物基本消耗盡，無需取出第yi次pcr產(chǎn)物，只需降低退火即可直接進(jìn)行pcr擴(kuò)增。這不僅減少操作步驟。同時(shí)也降低了交叉污染的機(jī)會(huì)。這種pcr稱中途進(jìn)退式pcr( drop-in， drop-out pcr)上述三種方法主要用于少量dna模板的擴(kuò)增。
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