RF 6A猴脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞

一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞
細(xì)胞別稱 rf/6a
細(xì)胞貨號(hào) snl-032
細(xì)胞種屬 恒河猴
生長(zhǎng)情況 貼壁
培養(yǎng)條件 h-dmem+10%fbs+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境 air, 95%; carbon dioxide (co2), 5%
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期 2-3天
培養(yǎng)基體積 t25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例 1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）
傳代方法 1.盡量吸干凈t25瓶原培養(yǎng)基；
2.加3-4ml 常溫pbs輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞10-20s，吸走潤(rùn)洗的pbs；
3.t25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層；
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；
5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未完全脫落時(shí)加2-3ml完全培養(yǎng)基終止胰酶消化；
6.混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清；
7.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
8.補(bǔ)足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
注意事項(xiàng) 部分懸浮細(xì)胞會(huì)附著瓶底，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)基或者吹打細(xì)胞面就會(huì)脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細(xì)胞操作，吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方 92%fbs+8%dmso(新手建議)或92%完全培養(yǎng)基+8%dmso(高手建議);
凍存規(guī)格 200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法 1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；
2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項(xiàng) 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案
我們建議使用尚恩生物rf/6a（猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞）專用完全培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號(hào)：snlm-032）作為體外培養(yǎng)rf/6a（猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞）的培養(yǎng)基。